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Ensayos de citotoxicidad

La ISO 10993-5:2009 describe métodos de prueba para evaluar la citotoxicidad in vitro de dispositivos médicos. Estos métodos especifican la incubación de células cultivadas en contacto con un dispositivo y/o extractos de un dispositivo, ya sea directamente o mediante difusión.

Estos métodos están diseñados para determinar la respuesta biológica de células de mamíferos in vitro utilizando parámetros biológicos apropiados.

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Métodos cualitativos de pruebas de citotoxicidad
Método de extracción/elución MEM

En Medio Mínimo Esencial (MEM), extraer el lixiviable de un dispositivo médico durante 24 horas. Luego se coloca un extracto sobre las células L929. Las células se examinan microscópicamente para detectar cambios morfológicos, degeneración y lisis de las células después de la incubación.

Prueba cualitativa de citotoxicidad con elución MEM.

Ensayo de superposición de agarosa/difusión de agar
En este método, se coloca una fina capa de agar suplementado con nutrientes sobre las células L929. El material de prueba se coloca encima de la capa de agar y las células se incuban durante 24 horas. El lixiviado citotóxico se difunde en la capa celular a través de la capa de agar, y se utilizará una zona de células malformadas, degenerativas o lisadas para evaluar la citotoxicidad.

Contacto directo
El material de prueba se coloca directamente sobre las células que crecen en un medio de cultivo sin la capa de agar, los cultivos celulares se cultivan hasta obtener una monocapa estándar y luego las células se incuban durante 24 horas a 37 ℃. Durante la incubación, las sustancias químicas lixiviables del material de prueba pueden difundirse en el medio de cultivo y entrar en contacto con la capa celular. Examinar las monocapas para detectar la presencia de cambios morfológicos, reducción de la densidad celular o lisis de células para indicar la citotoxicidad.

Métodos cuantitativos de pruebas de citotoxicidad
Ensayo MTT

El ensayo MTT se utiliza a menudo para determinar la viabilidad celular (detecta células viables). El MTT se puede utilizar para evaluar la citotoxicidad de compuestos y toxinas tóxicas y contaminantes ambientales.

Ensayo de calceína
La calceína-AM se utiliza en las pruebas de viabilidad celular, ya que puede atravesar la membrana celular hasta llegar a las células vivas. Después de ser transportado al interior de las células, el grupo acetometoxi se elimina de las esterasas intracelulares, la molécula queda atrapada en el interior y emite una fuerte fluorescencia verde. Sólo las células vivas se marcan y cuentan mediante citometría de flujo, ya que las células muertas carecen de esterasas activas.

Ensayo de rojo neutro (NR)
El ensayo de rojo neutro (NR) es un ensayo de quimiosensibilidad de supervivencia celular. Este ensayo se basa en la incorporación de NR en los lisosomas de células viables después de ser incubadas con agentes de prueba. Cuando se determinó un efecto citotóxico reducido mediante la prueba NR, que muestra la actividad de las enzimas lisosomales, se observó microscópicamente una multiplicación o agrandamiento de los lisosomas.

Ensayo de fuga de lactato deshidrogenasa (LDH)
La lactato deshidrogenasa es una enzima citosólica soluble presente en la mayoría de las células eucariotas y se liberará en el medio de cultivo tras la muerte celular debido al daño a la membrana plasmática. El aumento de la actividad de LDH en el sobrenadante del cultivo es proporcional al número de células lisadas. Posteriormente, la actividad de la LDH puede indicar la integridad de la membrana celular y evaluar la citotoxicidad resultante de compuestos químicos o factores tóxicos ambientales.

CENEBA BIOPROCESS ofrece un servicio de pruebas de citotoxicidad de dispositivos médicos para avanzar en el desarrollo de su dispositivo médico y facilitar que los fabricantes presenten su dispositivo médico para la aprobación regulatoria. Si tiene preguntas adicionales sobre citotoxicidad o desea obtener más información sobre nuestros servicios, no dude en contactarnos.

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